CD38环化酶活性抑制剂筛选检测试剂盒：支持抑制剂高通量筛选与IC50测定

CD38分化簇38又称环ADP核糖水解酶1是一种跨膜糖蛋白和外切酶在调节细胞内钙离子稳态中发挥关键作用。CD38是多发性骨髓瘤MM细胞表面高度表达的抗原而在正常淋巴和髓系细胞中表达水平较低因此成为免疫治疗极具吸引力的靶抗原。2015年FDA批准了靶向CD38的单克隆抗体daratumumabDarzalex 用于治疗多发性骨髓瘤标志着CD38靶向疗法的重大突破。此外CD38的表达还与HIV感染、白血病及2型糖尿病T2D相关。近年来研究发现肺癌患者中CD38的上调水平与患者生存率相关其酶活性可促进细胞迁移、增殖及肿瘤进展。CD38也成为嵌合抗原受体T细胞CAR-T疗法的热门靶点通过逆转录病毒转导构建全人源CD38特异性CAR-T细胞为CD38相关疾病如肺癌开辟了新的治疗途径。CD38具有两种酶活性水解酶活性水解NAD⁺生成ADPR和环化酶活性催化NAD⁺生成环ADPR。其中环化酶活性在调节细胞内钙信号中尤为重要。为满足科研人员在CD38环化酶活性抑制剂筛选及药物发现中的需求由艾美捷代理BPS Bioscience公司推出的CD38抑制剂筛选检测试剂盒环化酶活性货号71275 提供了一套完整、灵敏、高通量兼容的解决方案。该试剂盒以96孔板格式为基础包含纯化的重组人CD38酶氨基酸43至C端、特异性底物烟酰胺鸟嘌呤二核苷酸NGD⁺及优化缓冲液支持100次酶反应适用于环化酶活性的酶动力学研究及小分子抑制剂的高通量筛选HTS。一、检测原理基于荧光法的环化酶活性测定CD38的环化酶活性可催化NGD⁺烟酰胺鸟嘌呤二核苷酸生成环状GDP-核糖cGDPR。与天然底物NAD⁺不同NGD⁺被CD38环化后生成的cGDPR具有天然荧光特性激发波长约300 nm发射波长约410 nm。因此该试剂盒采用直接荧光检测法在反应体系中加入CD38酶和NGD⁺底物酶催化反应生成荧光产物cGDPR荧光强度与CD38环化酶活性成正比。当存在抑制剂时酶活性被抑制荧光信号降低。这种“直接荧光”检测模式具有以下优势均相免洗无需分离产物或添加额外检测试剂实现“加样-混合-孵育-读数”的简便操作。实时监测可连续读取荧光值获取酶反应的初始速率用于精确的动力学分析。成本效益高无需标记抗体或酶联检测试剂降低单次实验成本。二、试剂盒核心组分与设计优势1. 即用型完整组分操作高效试剂盒提供所有必需成分纯化的重组人CD38酶氨基酸43至C端保留完整的环化酶活性无标签干扰。荧光底物NGD⁺特异性检测环化酶活性背景荧光极低。CD38检测缓冲液优化pH和离子组成确保酶反应在最适条件下进行。96孔微孔板可选部分规格包含。详细的实验操作说明书。2. 支持酶动力学与抑制剂IC50测定利用该试剂盒研究人员可以测定酶动力学参数通过改变NGD⁺底物浓度计算CD38环化酶的Km、Vmax和kcat/Km比较不同突变体或不同条件下的催化效率。筛选小分子抑制剂在固定酶和底物浓度下加入梯度稀释的待测化合物孵育后读取荧光值计算抑制率并拟合IC50曲线。高通量筛选HTS96孔板格式兼容自动化移液工作站可在单次实验中完成数百个化合物的初筛。3. 阳性对照建议虽然试剂盒本身不提供阳性对照抑制剂但文献中已知的CD38环化酶抑制剂如kuromanin、apigenin等可作为阳性对照。建议用户自行准备已知抑制剂以验证实验体系的可靠性。BPS Bioscience也可提供推荐对照品需另行购买。三、应用场景与科研价值1. 多发性骨髓瘤药物筛选Daratumumab的成功证实了CD38靶向治疗的临床价值。然而单克隆抗体成本高、需注射给药且部分患者产生耐药。小分子CD38环化酶抑制剂可作为替代或联合治疗策略。利用该试剂盒可快速筛选能够抑制CD38环化酶活性的小分子化合物为开发口服CD38抑制剂提供先导化合物。2. 肺癌及其他实体瘤研究研究表明CD38在肺癌患者中的上调与不良预后相关其环化酶活性通过调节细胞内钙信号促进肿瘤细胞迁移、增殖和转移。利用该试剂盒可以评估候选化合物对肺癌细胞中CD38环化酶活性的抑制效果为开发新型肺癌治疗药物提供实验依据。此外该试剂盒也适用于其他CD38相关实体瘤如前列腺癌、胰腺癌的药物筛选。3. 自身免疫病及炎症疾病CD38在调节性T细胞Treg和髓系抑制细胞MDSC中的表达与免疫抑制功能相关。通过筛选CD38环化酶抑制剂可能恢复抗肿瘤免疫或减轻自身免疫病理。该试剂盒可用于评估免疫调节剂对CD38酶活性的影响拓展CD38靶点的应用范围。4. 酶学机制与结构生物学研究纯化的重组CD38酶和特异性NGD⁺底物为结构生物学研究提供了理想工具。通过测定不同突变体的酶活性可以定位CD38环化酶活性中心的关键氨基酸残基为理性药物设计提供结构基础。五、产品数据六、文献参考Cui Q., et al., 2021 J Hematol Oncol. 14(1):82.Gao L., et al., 2021 Cell Death Dis. 12(7):680.